بررسی پروتئین شوک حرارتی a (hspa) helicobacter pylori به منظور تولید پروتئین نوترکیب برای اهداف ایمونولوژیک
پایان نامه
- دانشگاه الزهراء علیها السلام
- نویسنده سمانه دولت آبادی
- استاد راهنما محمود محمودی طاهره فلسفی
- سال انتشار 1393
چکیده
lactococcus lactis یک باکتری پروبیوتیک بی خطر است که پتانسیل بالایی برای کلونینگ آنتی ژن های مختلف از جمله پروتئین های h. pylori را داراست. در بین آنتی ژن های مختلف برای تولید واکسن علیه عفونت h. pylori ، پروتئین شوک حرارتی a (hspa) یکی از کاندیداهای ارزشمند است که به وسیله همه سویه های h. pylori بیان می شود و زمانی که به صورت خوراکی به موش تلقیح می شود، واکنش های نامساعد را ایجاد نمی کند. هدف از پژوهش حاضر ساخت و آزمایش یک شاتل وکتور برای کلونینگ ژن hspa h. pylori به منظور بیان در میزبان lactococcus lactis با استفاده از سیستم القایی nice می باشد. توالی ژن hspa ( برپایه توالی باکتری h. pylori 26695 ) حاوی ترادف های بهینه شده و his-tag ساخته شد وآنالیزهای مختلف بیوانفورماتیکی پس از بهینه سازی بر روی آن صورت گرفت. این قطعه به داخل شاتل وکتور e. coli-l. lactis ، pnz8148 اضافه شد و سپس به باکتری e. coli mc1061 انتقال یافت. ترنسفورمانت ها پس از تعیین هویت و تخلیص پلاسمید نوترکیب با استفاده از الکتروپوریشن واردl. lactis nz9000 گردیدند. بیان hspa به وسیله نایسین القا شد و پروتئین به وسیله sds-page آنالیز گردید همچنین شرایط برای بیان پروتئین نوترکیب مورد نظر بهینه سازی شد. نتایج آنالیزهای بیوانفورماتیکی مبین عدم تأثیر گذاری بهینه سازی کدونی و افزودن دنباله هیستیدینی بر جایگاه فعال و ساختار سه بعدی پروتئین بهینه شده بود. همچنین بررسی های آنتی ژنیسیته نشان دهنده حضور اپی توپ سطحی با قابلیت شناسایی توسط mhc-iiدر پروتئین بهینه شده بود. برش آنزیمی، pcr و تعیین توالی محصول کلونینگ، حضور ژن hspa را در شاتل وکتور pnz8148 و در باکتری ترنسفورم شده l. lactis nz9000 تأیید کرد. نتایج sds-page نشان داد که پروتئینhspa به وسیله l. lactis nz9000 بیان گردیده است و همچنین میزان بیان نقش نایسین را به عنوان یک القاگر تأیید نمود. از آنجایی که l. lactis علاوه بر ویـژگی های پروبیوتیـکی بیان کننده پروتئین نسبت به e. coli مزیت دارد و نیز واجد سیستم کنترل کننده میزان بیان است بنابراین می تواند کاندیدای امید بخشی برای ساخت واکسن خوراکی علیه h. pylori باشد. انتقال موفقیت آمیز ژن hspa بهینه شده یh. pylori در l. lactis nz9000 از طریق ساخت شاتل وکتور و بیان آن به وسیله سیستم nice دارای اهمیت است.
منابع مشابه
بررسی پروتئین helicobacter pylori oipa به منظور تولید پروتئین نوترکیب برای اهداف ایمونولوژیک
پروتئین oipa (outer inflammatory protein a) یکی از مهمترین ادهزینهای h. pylori و کاندید مناسبی برای ساخت واکسن است. ژن آن تحت تنظیم وضعیت on-off در ارتباط با بیان پروتئین oipa است. هدف از این مطالعه به دست آوردن یک کلون نوترکیب (با وضعیت on) از یک ایزوله بالینی h. pylori با میزان بیان بالا برای پروتئین غشای بیرونی (omp) با وزن مولکولی kda 35-33 است. برای تکثیر ژن oipa از سویه ایرانی، پرایمر اخ...
15 صفحه اولتولید پروتئینهای نوترکیب فسفولیپاز D و پروتئین شوک حرارتی کورینه باکتریوم سودوتوبرکلوزیس
زمینه مطالعه: بیماری لنفادنیت پنیری ناشی از کورینه‌باکتریوم سودوتوبرکلوزیس یکی از مهمترین بیماری‌های گوسفند و بز است که منجر به ضرر‌های اقتصادی دام‌پروران می‌شود. فسفولیپاز Dا(PLD) این باکتری یک اگزوتوکسین قوی است که به‌عنوان یک عامل حدت اصلی آن در نظر گرفته می‌شود و احتمالاًً در انتشار باکتری از محل عفونت به سایر قسمت‌های بدن میزبان مشارکت دارد. پروتئینهای شوک حرارتی (HSPs) کاندیداهای خوبی بر...
متن کاملپروتئین شوک حرارتی؛ کاندید واکسن سرطان
Background: Tumor cells express antigens that can be recognized by immune system as foreign particles. Heat shock proteins (HSPs) are molecular chaperones that bind to tumor antigens and mediate their uptake into antigen presenting cells. Methods: This articles is a review article and its data has been collected and categorized from the articles in the field of cancer immunotherapy. All the ar...
متن کاملشناسایی مولکولی ژن تولید کننده پروتئین شوک حرارتی 70 کیلودالتونی در قارچ درماتوفیت ترایکوفایتون وروکوزوم
سابقه و هدف: ترایکوفایتون وروکوزوم (T.verrucosum) یکی از قارچهای درماتوفیت است که پوست و ضمایم آن در انسان و حیوانات به ویژه دام را مورد تهاجم قرار می دهد. در مطالعه حاضر سعی شده است تا پروتئین های کاپرونی منسوب به پروتئین های شوک حرارتی 70 کیلودالتونی در این قارچ تشخیص داده شده و بیان ژن مولد آن تحت شرایط استرس گرمایی بررسی شود.روش بررسی: در این مطالعه تجربی، پرایمرهایی به اندازه 20 یا 21 نوکل...
متن کاملمنابع من
با ذخیره ی این منبع در منابع من، دسترسی به آن را برای استفاده های بعدی آسان تر کنید
ذخیره در منابع من قبلا به منابع من ذحیره شده{@ msg_add @}
نوع سند: پایان نامه
دانشگاه الزهراء علیها السلام
میزبانی شده توسط پلتفرم ابری doprax.com
copyright © 2015-2023